服务与技术服务类问题

问题:关于技术性问题我怎样联系你们?
答案:请发邮件至:
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我们将尽快通过电子邮件回复您的问题。

问题:我应怎样制备及需要制备多少质粒样品?
答案:您需要确认您的质粒样品是正确的构建体(通过酶切或测序),进行标准化的质粒抽提,样品必须没有胶粒(可直接用于注射),质量达到Qiagen midi/maxi试剂盒水平,浓度至少为500 ng/µl。对于P-element转基因服务,样品总量至少为50 µg,对于PhiC31系统转基因服务至少为20 µg, 对于CRISPR系统的转基因服务每个组分至少提供20 µg或至少30 µl已包含全部组分的预混合液。

DNA最好溶解于高纯度水中,便于直接配制并注射。除此之外也可以使用TE或Qiagen EB缓冲液进行溶解。无论是何种情况,请在订单的备注栏里清楚说明,便于我们正确地地配制注射样品。

如果您订购了DNA制备服务 (Service Z),请寄送至少3~5 µg质粒样品,用于进行细菌转化和质量检测 (酶切或PCR鉴定) 对照。如果您直接送交菌种,请使用琼脂穿刺管。对于BAC质粒抽提服务,建议直接寄送菌种或正确的质粒图谱,便于质量控制。

问题:我可以使用自己的P-element转座酶辅助质粒吗?
答案:可以。通常情况下,我们在配制您的P-element质粒样品时会为您提供适宜配比的转座酶辅助质粒一同注射。如果您想用您自己的辅助质粒,请寄送Qiagen midiprep纯度,浓度 >500 ng/µl,总量>20 µg的辅助质粒。

问题:我可以使用自己的果蝇品系进行注射吗?
答案:可以。除了w1118yw果蝇品系,我们亦可以注射您提供的果蝇品系,每个新种的操作费为700元。详情参见新果蝇品系

问题:胚胎可以保持在18℃环境下进行注射或培养吗?
答案:可以,只有当您在订单备注里明确提出此要求的情况下,我们才会如此操作。此外,如果您认为您研究的目的片段可能对果蝇具有致死性或在质粒上的目的片段由热激启动子(heat shock promoter) 或类似启动子控制,转基因服务在适宜的阶段或全程需要在18℃环境下操作和生长,请您一定提前通知我们! 由于在18℃环境下果蝇生长放缓,服务完成时间将相应延长。

问题:我多长时间能得到注射后的幼虫或转基因品系?
答案:我们收到DNA样品后立刻安排注射。以服务流程最短的Plan A为例,从收到DNA、完成注射到交付幼虫的周转时间不超过10天。对于不同服务类型,交付时间将按照生命周期相应增加 (参见技术服务)。我们将通过FedEx寄送果蝇幼虫或成虫。

问题:我能否使用自己提供的除了FM7, CyO, TM3, TM6B之外的平衡子果蝇品系?
答案:通常情况不可以,如果您的确有需要,您可以发送电子邮件至:
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问题:服务完成并交付后,每个转基因品系可以继续在贵公司保存多久?
答案:对于Plan B/C/E/F/H/I/J/K/M/N,我们将在您签收果蝇的两周后毁弃G2代或带平衡子的转基因品系。如果您收到果蝇后出现任何问题请在两周内通知我们,便于重新寄送备份果蝇给您,并延长2周备份时间。


Phi31系统相关问题
问题:哪个 PhiC31的果蝇品系表达效率更高? 
答案: Bellen的相关论文及Basler的网站上列出了white基因在各个PhiC31种中眼睛颜色深浅的数据。PhiC31已经列出了我们实际观察的眼睛颜色深浅的数据。不过,由于white基因的一些特性,眼睛颜色并不能很好地代表目的片段在attP位点的表达效率,只能作为参考。

问题:哪个PhiC31的果蝇品系转基因效率更高?
答案:您可以从Bellen的相关论文及Basler的网站上获得相关信息。PhiC31汇集了我们过往工作中各个果蝇品系转基因效率的评分,对于P{CaryP}、FlyC31和P[acman]果蝇品系特别汇集了>30 kb BAC质粒的转化效率的评分。以上数据我们将继续统计并定期更新。

问题:对于PhiC31系统的DNA样品质量有无特殊要求?
答案:使用与P-element系统相同质量的DNA即可。有数据显示CsCl梯度离心法纯度的DNA具有更高的转化效率 (~2倍),但如果您对于CsCl梯度离心法并不熟悉,使用Qiagen midi/Maxi 质粒抽提试剂盒即可满足要求。

问题:我在哪里可以得到FlyC31/P[acman]/MiMIC系统的载体?
答案:请参看Basler 实验室,pUASTattB及pattB载体可直接向其发送邮件索取,Bellen 实验室的载体则全部都可以从 (Drosophila Genomic Resource Center) 直接订购。


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